MR DAVIDE VECCHIETTI¹, MRS MAURA BRAMBILLA², MR DAISUKE KAWAKAMI³, MR TAKU TSUKAMOTO³, PR. PAOLO BRAMBILLA², MR STEPHANE MOREAU<sup>4

1</sup>Shimadzu Corporation, Milan, Italy, ²Desio Hospital, Toxicology and Mass spectrometry unit, Desio, Italy, ³Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan, ⁴Shimadzu Europa GmbH, Albert Hahn Strasse 6-10, D-47269 Duisburg, Germany

Contexte: L’analyse des immunosuppresseurs pour le suivi thérapeutique des patients transplantés a besoin d’être réalisé avec des techniques analytiques de manière extrèmement précise. La chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse montre une sensibilité et une spécificité supérieures comparativement aux techniques immuno-assays, couramment utilisées, sans présenter les effets de cross-reactions. Néanmoins, les systèmes LC-MS/MS souffrent jusqu’àlors d’un manque d’automatisation pour devenir un standard.

Objectifs: Avec l’objectif d’améliorer la productivité et simplifier le processus d’analyse des immunosuppresseurs, nous avons complètement éliminé la préparation manuelle en utilisant un nouveau système de préparation (CLAM-2000, Shimadzu) complètement intégré avec la LC-MS/MS.

Matériels et méthodes: Tous les échantillons (EDTA sang total), et les réactifs (“MassTox®” kit Chromsystems, 93000) sont chargés sur le CLAM-2000 couplé en ligne avec le système LC-MS/MS (NexeraX2-LCMS-8050, Shimadzu). La préparation entièrement automatisée et l’analyse consistent en 3 étapes: 1) distribuer les échantillons, le tampon, les standards internes; 2) agiter, incuber, filtrer 3) analyse LC-MS/MS

Résultats: les travaux ont été réalisés sur une plate-forme entièrement automatisée pour la quantification de quatre immunosuppresseurs majeurs (cyclosporine A, tacrolimus, sirolimus et évérolimus) dans des échantillons de sang total sans préparation d'échantillon manuelle par un opérateur. Les LOQ pour tous les composés sont < 0,5 µg/. Nous avons utilisé une large gamme de calibration avec 6 niveaux pour tous les composés et nous avons obtenu une bonne linéarité sur toute la plage (r2> 0,997). Nous avons testé la précision “intra-day” (répétabilité) de la méthode et la plateforme automatisée donne des CV% de l’ordre de 2,5% à 8%, ne montrant également pas d'effets de contamination. La précision “inter-day” (reproductibilité) est conforme aux lignes directrices du CLSI, avec des CV% <12%. Enfin, les résultats sur les échantillons de sang total ont montré une forte corrélation avec l'analyse par immuno-assay.